产品概述

DNaseⅠ(脱氧核糖核酸酶Ⅰ)，即 DeoxyribonucleaseⅠ，是一种可消化单链或双链 DNA 的脱氧核糖核酸内切酶，它识别并切割磷酸二酯键，产生 5'端为磷酸基团，3'端为羟基的单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸。DNaseⅠ的活性依赖于 Ca2+，并可被二价金属离子 Mg2+、Mn2+等激活。在 Mg2+存在的情况下，该酶可随机识别并切割双链 DNA 任意一条链上的任意位点；而在 Mn2+存在的情况下，可识别并切割 DNA 两条链上几乎相同的位点，产生平末端或有 1 - 2 个核苷酸突出的粘末端 DNA 片段。

产品组分  

酶活单位定义

用 37℃ 10 min，将能够完全降解 1 μg pUC19 质粒 DNA 所需的酶量定义为 1 个活性单位(U)。

保存、运输条件

Ø -20°C保存， 运输条件：≤0℃。

Ø 有效期2年，避免反复冻融。

质量控制

Ø 纯度：≥90%；

Ø RNase 残留检测：使用 100 U 本品，参照 RNaseAlert QC System 说明书未检测到 RNase 残留；

Ø 功能检测：投入 500 ng 人源基因组 DNA，经 1 U DNaseⅠ处理后，进行两对质控引物的 qPCR 检测，清除效率>99.9%。

适用场景

适用于 RNA 提取、体外转录、RT-PCR 实验中 DNA 的去除，DNaseⅠ印迹(DNaseⅠ footprinting)，缺口平移 (nick translatioin)，DNA 随机片段文库构建等分子生物学实验。

注意事项

Ø 在使用本品进行 RNA 样品中 DNA 的清除实验时，可在反应体系中添加 Murine RNase Inhibitor 以保护 RNA 不被降解。

Ø 部分实验条件下，DNaseⅠ的最佳使用量需要通过实验进行调整。

Ø 失活或抑制：加入终浓度为 5 mM 的 EDTA 并经过 65℃加热 10 min，或通过酚氯仿抽提可使 DNaseⅠ失活。此外，使用金属离子螯合剂， 达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的 SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50 - 100 mM 以上盐浓度均对 DNaseⅠ的活性有显著抑制作用。

应用实例

体外转录后模板 DNA 的去除

Ø 每 0.5 μg 模板 DNA 的转录反应体系中加入 1 U DNaseⅠ；

Ø 用移液枪轻轻吹打混匀，37℃ 15 min；

Ø 酚/氯仿抽提失活 DNaseⅠ。