产品概述

T4 Polynucleotide Kinase能够催化ATP的γ-磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5'-羟基末端以及3'-单磷酸核苷上。T4 Polynucleotide Kinase还具有3'-磷酸酶活性，将3'-磷酸基团从寡核苷酸的3'磷酸末端、脱氧3'-单磷酸核苷和脱氧3'-二磷酸核苷上水解掉。

产品组分  

酶活单位定义

37℃、30分钟内使1 nmol的[γ-32P] ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

保存、运输条件

-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输，避免反复冻融。

适用场景

Ø 标记核酸的 5'-末端，用作以下物质：

--用于杂交的探针

--用于转录本映射的探针

--用于凝胶电泳的标志物

--用于 DNA 测序的引物

--用于 PCR 的引物

Ø 连接前寡核苷酸、PCR 产物、其他 DNA 或 RNA 的 5'-磷酸化

Ø PCR 引物的磷酸化

Ø 通过 [32P]-标记后试验进行的 DNA 修饰检测

Ø 去除 3'-磷酸基。

工作条件

10 × Reacton Buffer：

Ø 700 mM Tris-HCl pH 7.6 @ 25℃

Ø  100 mM MgCl2

Ø 50 mM DTT。

注意事项

Ø 可通过正向反应或交换反应标记核酸的 5'-末端。

Ø 聚乙二醇 (PEG) 和亚精胺改善磷酸化反应的速率和效率。PEG 用于交换反应混合物。

Ø 由于 T4 多聚核苷酸激酶受到铵离子抑制，在磷酸化之前请使用醋酸钠来沉淀 DNA。