产品概述

真核生物中，mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊的帽子结构(m7Gppp5'N)，此结构与mRNA的稳定性、转运(出核)和翻译紧密相关。通过酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法，能够显著改善体外转录的用于转染和显微注射的RNA的稳定性和翻译能力。牛痘病毒加帽酶(Vaccinia Capping Enzyme)由两个亚基(D1，D12)组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性， 它们对于添加一个完全的Cap0结构都是必须的。在合适浓度的S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosylmethionine，SAM)，鸟苷三磷酸(GTP)等条件存在下，牛痘病毒加帽酶能够将帽子结构(m7Gppp，Cap0)加到RNA5'端。本品可用于T7   RNA    Polymerase催化的体外转录反应产生的RNA的加帽反应。

产品组分  

酶活单位定义

加帽酶：37℃，pH 8.0条件下，1小时内使10 nmol [α-32P] GTP掺入80 nt寡核苷酸转录产物所需要的酶量定义为1个活性单位。

保存、运输条件

Ø 储存缓冲液：50 mM Tris-HCl (25℃，pH 8.0)，100 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，0.1% Triton X-100，50% Glycerol

Ø 储存条件：-30 ~ -15℃，避免反复冻融，≤0°C运输。

条件工作

1x 加帽缓冲液：50 mM Tris-HCl (25℃，pH 8.0)，5 mM KCl，1 mM MgCl2，1 mM DTT

适用场景

Ø 体内或体外翻译前mRNA的加帽反应和5'末端标记反应。

工作条件

Ø 最适温度：37℃

Ø 转录缓冲液 (1x)：40 mM Tris-HCl (25℃，pH 8.0)，20 mM MgCl2，2.5 mM TCEP，2 mM spermidine