产品概述

本制品T7 RNA Polymerase (T7 RNA聚合酶)为重组E.coli表达的噬菌体T7 DNA编码的蛋白，是一种高度特异性识别T7启动子序列的DNA依赖的5'→3'      RNA聚合酶。本制品以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，NTP为底物，合成与启动子下游的单链DNA或双链DNA模板链互补的RNA。

产品组分  

酶活单位定义

37℃，pH 8.0条件下，1小时内使1 nmol [3H] ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

保存、运输条件

Ø 储存缓冲液：50 mM Tris-HCl (25℃，pH 7.9)，100 mM NaCl，0.1 mM EDTA，2 mM DTT，0.1% Triton X-100，50% Glycerol

Ø 储存条件：-30 ~ -15℃，避免反复冻融，≤0°C运输。

反应条件

适用场景

Ø 合成单链RNA，包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA的前体。

Ø 合成标记或未标记的高特异性RNA探针。

Ø 利用帽子类似物合成加帽的mRNA。

工作条件

Ø 最适温度：37℃

Ø 转录缓冲液 (1x)：40 mM Tris-HCl (25℃，pH 8.0)，20 mM MgCl2，2.5 mM TCEP，2 mM spermidine

注意事项

Ø 模板DNA的纯度对体外转录反应至关重要。质粒DNA抽提过程中引入的RNase A残留会显著影响转录RNA的质量，建议使用OD260/280

Ø 为1.8 - 2.0的高纯度RNase-free质粒。

Ø 模板DNA可通过线性化环状质粒或PCR获得。模板DNA上游需含有T7启动子序列，下游为平末端或编码链5'末端突出。

Ø 反应体系中可添加RNA酶抑制剂(BOLAZ #RT0911)防止RNase污染，建议使用浓度1 - 2 U/μl。

Ø 反应体系中添加无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。