产品概述

Topoisomerase I 来源于牛痘病毒（vaccinia virus），通过基因重组方案制备纯化。其能解旋DNA的超螺旋结构，除此外其能识别并切割双链DNA末端 [5’C(T)CCTT↓]，并且与DNA形成共价连接形成稳定复合物。该共价复合物遇到DNA的5’-OH基团后，重新连接形成完整DNA链。因此，使用Topoisomerase I 酶可作为DNA的连接有效工具。其可用于DNA的载体连接、缺刻修复、接头连接等实验。

产品组分  

酶活单位定义

在37℃条件下，1h内使1μg超螺旋pUC19 DNA解旋所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

保存、运输条件

Ø -30 ~ -15°C保存，≤0℃冰袋运输，避免反复冻融。

适用场景

本产品适用于通过瞬时断裂并重新连接磷酸二酯键，催化去除共价闭合 DNA 的超螺旋圈：

Ø DNA-载体连接

Ø 缺刻修复

Ø 接头连接

工作条件

Ø 该酶的最佳反应温度为37℃。80℃ 20min可使该酶失活。

Ø 1x工作反应液：50mM Tris-acetate (pH 7.5), 100mM NaCl, 2.5mM MgCl2。

注意事项

Ø 该酶切割偶联试验时，识别位点[5’C(T)CCTT↓]的3’端碱基数量影响偶联效率。

Ø 共价复合物进行DNA分子连接时，底物5’-端需要保留-OH基团