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产品概述
热启动HS Taq DNA Polymerase是经过化学修饰的Taq DNA Polymerase, 在室温下活性被完全封闭,只有经过95℃加热后活性才被释放,可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体。与基于抗体的热启动Taq酶相比, 热启动 HS Taq DNA Polymerase活性封闭更彻底,严谨性更高;与现有经化学修饰的热启动HS Taq酶相比, 热启动 HS Taq DNA Polymerase 的激活时间只需要 5min, 兼容现有的PCR程序。 热启动HS Taq DNA Polymerase配合优化的缓冲体系,可最大程度的减少非特异扩增和引物二聚体,带来极高的灵敏度和特异性,非常适合于从复杂模板中扩增低拷贝基因。
产品组分
酶活定义
Ø 用活化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物, 74℃ 30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
保存、运输条件
Ø -30 ~ -15°C保存, ≤0℃冰袋运输,避免反复冻融。
Ø 有效期2年,避免反复冻融。
适用场景
本产品广泛适用于动物,植物以及微生物等DNA的扩增反应:
Ø 热启动酶因具有 5’-3’核酸外切酶活性,可用于荧光定量 PCR 反应。采用热启动法扩增是提高 PCR 特异性的常用方法,热启动酶是很好的选择。
Ø 除此之外,因其具有的高特异性高灵敏度被广泛应用到各个方面:构建 cDNA 文库,产生大量 DNA 测序,突变体分的析构建,基因分离,遗传病诊断,法医鉴定等。
注意事项
引物设计:
1. 引物3'端最后一个碱基最好为G或者C;
2. 引物3'端最后8个碱基应避免出现连续错配;
3. 引物3'端应避免出现发夹结构;
4. 正向引物和反向引物的Tm值相差不超过1℃为佳, Tm值调整至55 ~ 65℃为佳(引物Tm值推荐使用Primer Premier 5进行计算);
5. 引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;
6. 引物的GC含量控制在40% - 60%之间;
7. 引物A、 G、 C、 T整体分布要尽量均匀,避免使用GC或者AT含量高的区域;
8. 避开引物内部或者两条引物之间有5个碱基以上的互补序列,两条引物的3'端避免有3个碱基以上的互补序列;
9. 引物设计完毕请使用NCBI BLAST功能检索引物特异性,以避免非特异性扩增产生。
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