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产品概述
在模板及引物存在的条件下,T4 DNA聚合酶催化沿5'→3'方向合成DNA。此酶还具有3'→5'核酸外切酶的活性,该活性比DNA聚合酶I强。与DNA聚合酶I不同,T4 DNA聚合酶不具有5'→3'核酸外切酶活性。
产品组分
酶活单位定义
37℃、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为1个活性单位(U)。
保存、运输条件
-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输,避免反复冻融。
适用场景
DNA链的3'突出末端切除或5'突出端补平,使DNA末端平滑化:
Ø DNA 末端钝化:填入5'-端或/和去除3'-端
Ø 用3’-dA 端钝化 PCR 产物
Ø 通过置换反应合成标记的 DNA 探针
Ø 寡核苷酸定点特异性诱变
Ø 非连接依赖性克隆PCR 产物
工作条件
10 × Reaction Buffer:100 mM Tris-HCl pH 7.9 @ 25℃; 500 mM NaCl; 100 mM MgCl2; 10 mM DTT。
注意事项
Ø 请使用高质量的模板。
Ø 请勿使用dUTP和带有尿嘧啶的引物和模板。
Ø 如实验需要,可适当提高Super-Fidelity DNA Polymerase的使用量,但50 μl 体系内酶量建议不要超过2 U。
Ø Super-Fidelity DNA Polymerase具有较强的校对活性。因此,如扩增产物需要进行TA克隆,加A之前必须进行DNA纯化。5.为了防止Super-Fidelity DNA Polymerase的校对活性降解引物,在配制反应体系时请最后加入聚合酶。
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